分子熒光分光光度計(jì)由光源發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)單色器處理后特定波長(zhǎng)的光照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)而發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過(guò)濾過(guò)和反射后，光信號(hào)被光電倍增管放大后，然后以圖或數(shù)字的形式在控制軟件上顯示出來(lái)。不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同，其激發(fā)態(tài)能級(jí)的分布具有各自不同的特征，各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜，因此可以用熒光化合物的該特征來(lái)進(jìn)行物質(zhì)的定性鑒定。
分子熒光分光光度計(jì)的熒光測(cè)試注意事項(xiàng)：
①樣品應(yīng)盛在四面透光的石英比色皿中，如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池。
②在熒光分析時(shí)，為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù)，一般需要開(kāi)機(jī)預(yù)熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈，預(yù)熱時(shí)間可以縮短到10min左右。對(duì)某些易感光、易分解的熒光物質(zhì)，盡量采用長(zhǎng)波長(zhǎng)、低人射光強(qiáng)度及短時(shí)間光照。
③溫度變化可引起熒光強(qiáng)度的改變。通常降低溫度，有利于提高熒光量子產(chǎn)率，熒光強(qiáng)度增大。溫度影響熒光強(qiáng)度的顯著程度因樣品而異，大部分熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度受溫度影響不大，測(cè)試溫度變化不超過(guò)±3℃，對(duì)測(cè)試結(jié)果幾乎無(wú)影響。
④當(dāng)熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時(shí)，溶液的pH對(duì)熒光強(qiáng)度有較大影響。因?yàn)槿跛峄蛉鯄A在不同酸度中，分子和離子的電離平衡會(huì)發(fā)生改變，而熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度會(huì)因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。
⑤分子結(jié)構(gòu)中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中，熒光效率顯著增強(qiáng)。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強(qiáng)度。
⑥瑞利散射和拉曼散射是溶劑的兩種散射光，應(yīng)注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當(dāng)做熒光光譜。瑞利散射光波長(zhǎng)與激發(fā)光波長(zhǎng)相同，拉曼散射與激發(fā)光波長(zhǎng)不同，而熒光物質(zhì)的熒光波長(zhǎng)與激發(fā)光波長(zhǎng)無(wú)關(guān)，因此可以通過(guò)選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)波長(zhǎng)將拉曼散射光與熒光分開(kāi)。在測(cè)試時(shí)選擇合適的狹縫寬度，或者空白扣除，也可以對(duì)散射光的影響進(jìn)行校正。
⑦熒光物質(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導(dǎo)致熒光強(qiáng)度降低，常見(jiàn)的熒光猝滅劑，如鹵素離子、重金屬離子、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現(xiàn)象，因此，在較嚴(yán)格的熒光實(shí)驗(yàn)中須除02。
⑧測(cè)試過(guò)程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看，以防對(duì)眼睛造成損傷。
⑨儀器房應(yīng)注意經(jīng)常通風(fēng)，避免產(chǎn)生的臭氧在室內(nèi)富集。
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